Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. Говоря «небольшой фрагмент ДНК», мы подразумеваем «обрывок» нуклеиновой цепочки длиной всего в несколько сотен пар нуклеотидов – тогда как любая, самая простая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.
Такой подход является наиболее эффективным при диагностике внутриклеточных паразитов и медленнорастущих микроорганизмов, требующих сложных условий культивирования для ранее использовавшихся способов диагностики.
Благодаря высокой точности определения появилась возможность поиска возбудителей болезней практически в любом биологическом материале. Сегодня методу ПЦР-анализа подвергаются:
• соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала);
• кровь, плазма, сыворотка крови;
• биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна);
• моча;
• мокрота;
• биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки;
• слизь и другие биологические выделения.
Достоинства метода
• Высокая специфичность за счет того, что искомые кусочки генетического материала имеют уникальные последовательности ДНК.
• Высокая чувствительность за счет многократного размножения исходного материала.
• Универсальность – при правильном подходе может быть проанализирован любой материал.
• Быстрое получение результата (в отличие от бактериологических методов, где результата приходится ждать довольно долго).
• Возможность одновременной диагностики многих возбудителей (анаэробов и аэробов; вирусов, бактерий и грибов).
• Для некоторых микроорганизмов ПЦР является практически единственным методом диагностики (например, для Mycoplasma genitalium).
ПЦР-анализ может быть качественный и количественный – т. е. может просто свидетельствовать о наличии того или иного возбудителя, а может и давать информацию о количественном содержании возбудителя в тех или иных биологических материалах.
Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу
Достоверность результатов лабораторной диагностики ПЦР зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие правила:
• за сутки до проведения анализа не жить половой жизнью;
• сдача ПЦР-анализа крови проводится натощак, т. е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку;
• для ПЦР-анализа мочи используется первая утренняя порция, собранная в чистый, стерильный контейнер.
ПЦР-анализы
В устоявшейся клинической практике ПЦР-анализы обычно сдают «блоками
[26]
» на определенные группы возбудителей.
Например:
• ПЦР-диагностика инфекций, передаваемых половым путем, где одноврем, енно выявляются:
бактериальные инфекции: Chlamydia trachomatis (хламидия), Mycoplasma hominis (микоплазма человека), Gardnerella va.gin.alis (гарднерелла), Mycoplasma genitalium (микоплазма генитальная), Ureaplasma parvum (уреаплазма парвум), Ureaplasma urealyticum (уреаплазма уреалитикум), Neisseriagonorrh.oea.e (гонококки);
вирусные инфекции: HPV (Human Papillomavirus, папиллома. вирус человека) типы 16, 31, 33, 35Н, 52, 58, 67; типы 18, 45, 39, 59; тип 6, 11; тип 26, 51;
инфекции, вызванные простейшими: Trichomonas va.gin.alis – трихомонады;
грибковые инфекции: Candida albicans – кандида;
• ПЦР-диагностика бактериальных инфекций:
бруцеллы: Brucella species вызывает заболевания дыхательных путей, мочевыделительной системы, органов половой сферы и опорно-двигательного аппарата;
гемофилы: к настоящему времени известно 9 видов гемофил, вызывающих инфекции у человека. Ha.emophilus ducrei вызывает инфекции, передающиеся половым путем (симптомы – обильные водянистые, периодически гноевидные выделения с неприятным запахом из половых путей, дизурические явления). Haemophilus speciec вызывает заболевания дыхательных путей (симптомы – поражение дыхательных путей; кашель с мокротой; повышение температуры тела; слабость, недомогание);
кампилобактерии: Campulobacter species вызывает воспалительные заболевания половых органов у женщин и мужчин со следующими симптомами:
♦ дизурические явления (небольшие рези при мочеиспускании);
♦ слизисто-гнойные выделения из половых путей;
♦ тянущие боли внизу живота;
листерии: Listeria monocytogenes вызывает заболевания отделов малого таза, мочевыводящих путей, суставов, органов дыхания со следующими симптомами:
♦ слизисто-гнойные выделения из половых путей;
♦ боли внизу живота;
♦ отек суставов, боли в суставах;
♦ кашель с мокротой;
♦ дизурические явления;
микобактерии туберкулеза: развитие туберкулезной инфекции вызывают 4 вида микобактерий: Mycobacterium tuberculosis; Mycoba.cterium bovis; Mycoba.cterium africanum; Mycobacterium microti. Однако в патогенезе туберкулеза у человека ведущая роль принадлежит именно Mycobacterium tuberculosis. Во всем мире каждый год регистрируют около 8 миллионов новых случаев этого тяжелого заболевания, около 3 миллионов человек ежегодно умирает от туберкулеза.
микоплазмы: внутриклеточные микробы, очень широко распространены в природе. Уреаплазмы – это особая и наиболее «популярная» разновидность патогенных для человека микоплазм. На их долю приходится большая часть хронических мико-плазмозов человека. Кроме уреаплазм известно еще несколько видов безусловно патогенных для человека видов: Mycoplasma species, Mycoplasma pneumonia, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasmaparvum. Наиболее часто патогенными видами микоплазм поражаются:
♦ мочеполовые органы: пиелонефрит, уретрит, нарушение овуляции и сперматогенеза;
♦ сердечно-сосудистая система.: артериальная гипотензия (гипотония), кардит, перикардит;
♦ органы пищеварения: невирусный гепатит, гастрит, холецистит, кишечные дисфункции (упорные диареи);
