Кровь из вены у обследуемого берут утром, путем пункции локтевой вены сухой острой короткой иглой с широким просветом без шприца, желательно – без наложения жгута на руку. При плохих венах допустим кратковременный веностаз лишь во время ввода иглы в вену посредством наложения слабой перетяжки – не более 30 мм. Допустимо производить легкий массаж предплечья по направлению от кисти к локтевому сгибу. Первые 5–6 капель крови выпускают на ватный тампон, так как они могут содержать тканевой тромбопластин.
Кровь в пробирки набирают свободным током, перемешивая ее с антикоагулянтом покачиванием или легким встряхиванием, не допуская образования воздушных пузырьков. До центрифугирования пробирки ставятся в ледяную баню (кружка со льдом и водой). Интервал времени между забором крови и началом исследования существенно сказывается на многих параметрах коагулограммы (табл. 17).
Поэтому в результатах анализа следует отмечать время взятия крови и время проведения исследования, чтобы при наблюдении в динамике интервал времени был одинаков и результаты сопоставимы.
Пробирки должны быть стеклянными силиконированными, либо пластиковыми и мерными, либо иметь метку, до которой должна быть набрана кровь, чтобы было соблюдено правильное соотношение крови и антикоагулянта, равное 9:1, если гематокрит близок к нормальному. При значительных отклонениях гематокрита от нормы нужные объемы крови и антикоагулянта берут в соотношениях, указанных в таблице 16.
Таблица 16. Соотношение крови и антикоагулянта для определения гематокрита
Таблица 17. Время хранения крови для проведения отдельных исследований систем гемостаза
В качестве антикоагулянта рекомендуется использовать 3,8 %-ный раствор цитрата натрия, поскольку в цитратной крови (плазме) лучше сохраняются факторы свертывания крови и тромбоциты.
Раствор оксалата натрия (1,34 %) используется ограниченно, так как оксалаты образуют с кальцием растворимое соединение (в плазме появляется мелкая зернистость), ускоряется агрегация тромбоцитов, ускоряется инактивация V и VIII факторов. Плазму готовят центрифугированием 15–20 мин при 3 тыс. оборотов в минуту.
Некоторые тесты могут быть выполнены из плазмы, полученной из капиллярной крови (ПТВ).
Прокол кожи на пальце проводят глубиной около 4 мм. Первые две капли крови удаляют, последующие используют для исследования. Кровь из ранки выдавливать не рекомендуется, так как при этом увеличивается примесь тканевого тромбопластина. Соотношение крови и цитрата – 9:1.
Доставка материала в клинико-диагностическую лабораторию для иммунологических и микробиологических исследований
Правила подготовки обследуемых, взятия и условия хранения и доставки материала для проведения исследований в КДЛ
Иммунологические исследования
Для исследования иммунной системы организма используют венозную кровь (плазму, сыворотку, форменные элементы: эритроциты, лейкоциты, лимфоциты), капиллярную кровь, а также биологические жидкости: мочу, слюну, желчь, молоко и т. д.
Венозную кровь забирает медсестра, капиллярную кровь – лаборант или врач (определение группы крови, резус-фактора).
Кровь у обследуемых берут утром, натощак, путем пункции локтевой вены сухой острой короткой иглой с широким просветом в чистую сухую пробирку в количестве 5–6 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь. У грудных детей кровь обычно берут из лобной, височной или яремной вены.
Если для исследований используют плазму или форменные элементы крови, кровь забирают в мерные пробирки или пробирки, имеющие метку, до которой должна быть набрана кровь. В пробирки предварительно вносят антикоагулянт.
Для забора крови желательно использовать пластиковую посуду. Стеклянные пробирки часто несут на поверхности следы детергентов, а также обладают способностью обмениваться ионами с кровью.
Удобно использовать коммерческие вакуумные пробирки, заполненные точным объемом и определенной, соответствующей концентрацией необходимого в конкретном случае антикоагулянта.
Наиболее часто используют трикалиевую или динатриевую соли ЭДТА, тринатрий цитрат и гепарин.
Несоответствие концентрации антикоагулянта объему взятой крови, недостаточно тщательное смешивание могут привести к значительным ошибкам (табл. 18).
Таблица 18. Соотношение крови и антикоагулянта
Плазму для определения иммуноглобулинов можно получить из капиллярной крови, взятой с помощью туберкулинового шприца из безымянного или указательного пальца. Предварительно шприц смачивают раствором гепарина (200 ЕД/мл) и высушивают в термостате при 37 °C в течение 24 ч. Шприцы, обработанные гепарином и высушенные, могут храниться в течение двух недель. Кровь из пальца берут в объеме 0,5 мл, переносят в центрифужную пробирку и несколько раз встряхивают. Затем кровь центрифугируют при 1 тыс. оборотов в минуту 5 мин. Плазму отсасывают в пластиковые пробирки.
Полученная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. От забора до анализа кровь может стоять при комнатной температуре 2 ч, сыворотка – 48 ч в холодильнике. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 ч при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике (температура 4–8 °C). Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. Лучше всего сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку или плазму. Плазму можно хранить при -20 °C более длительное время.
Осадок используют для приготовления клеточной суспензии. Для этого к осадку, полученному из 0,5 мл крови, добавляют 1 мл 1 %-ного раствора желатина, приготовленного на среде 199. Ставят в термостат при 37 °C на 30 мин. Отбирают в центрифужную пробирку надосадочный слой, состоящий из клеток белой крови. К надосадочной жидкости добавляют 2–3 мл среды 199. Тщательно перемешивают. Центрифугируют при 1 тыс. оборотов в минуту 10 мин. Надосадочную жидкость сливают. К осадку добавляют 0,5 мл среды 199 и с помощью интенсивного 3-4-кратного пипетирования размешивают. Лейкоцитарная взвесь готова к употреблению.
Для определения групп крови по системе АВО используют капиллярную и венозную кровь. Взятие капиллярной крови проводит лаборант непосредственно перед определением. 0,05 мл крови сухой стеклянной палочкой наносят рядом с каждой каплей стандартной сыворотки.
Кровь можно брать из вены, пальца или из мочки уха. Исследуемую кровь берут в сухую несиликонированную пробирку. Для отделения сыворотки кровь центрифугируют и оставляют стоять на 20–30 мин. Из пробирки, содержащей исследуемую кровь, пипеткой извлекают сыворотку. Пробирку со свернувшейся кровью энергично встряхивают для отделения эритроцитов.
