Заранее наливают в пробирки соответствующие реактивы: для определения СОЭ – в капилляр Панченкова набирают 25 мкл (до метки 75) реактива 1; для определения концентрации гемоглобина – 5 мл реактива 2; для подсчета числа эритроцитов – 4 мл реактива 3; для подсчета числа лейкоцитов – 0,4 мл реактива 4.
Гемоглобин (НВ)Гемоглобин – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам и обеспечивающий ткани кислородом; состоит из белка – глобина и гема – соединения протопорфирина IX с железом. Последний придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски, на этом основано и определение концентрации гемоглобина в крови.
Исследование содержания гемоглобина в крови (гемоглобинометрия) включает определение гемоглобина и его дериватов, которые присутствуют в крови здоровых людей или появляются при различных патологических состояниях. У здоровых людей гемоглобин в крови находится главным образом в виде оксигемоглобина, восстановленного гемоглобина и в небольшом количестве – метгемоглобина, карбоксигемоглобина и вердоглобина.
Нормальные величины
У здоровых людей концентрация гемоглобина в крови составляет:
1) мужчины – 132–164 г/л;
2) женщины – 115–145 г/л;
3) новорожденные – 135–195 г/л;
4) дети 1 года – 110–130 г/л;
5) дети 10–12 лет – 115–145 г/л.
Дневные колебания: значения гемоглобина минимальны утром и максимальны вечером.
Клиническое значение
Снижение концентрации гемоглобина в крови является основным лабораторным симптомом анемии. При этом содержание гемоглобина варьирует в широких пределах в зависимости от формы анемии и ее степени. Следует, однако, иметь в виду, что диагностика анемии ни в коей мере не может быть проведена лишь на основании определения концентрации гемоглобина в крови. Это исследование устанавливает только факт наличия анемии. Для уточнения ее характера необходимо исследование количества эритроцитов, цветового показателя, других расчетных индексов эритроцитов, морфологии эритроцитов.
Повышение концентрации гемоглобина в крови может наблюдаться при миелопролиферативных заболеваниях и симптоматических эритроцитозах, сопутствующих различным состояниям. Среди миелопролиферативных заболеваний наиболее характерно повышение гемоглобина при эритремии. Симптоматические реактивные эритроцитозы могут быть абсолютными (обусловлены пролиферацией элементов эритропоэза) и относительными (гемоконцентрационные). Физиологическое увеличение содержания гемоглобина свойственно новорожденным.
Фракции гемоглобина
Существуют физиологические и патологические виды гемоглобина. К физиологическим относят три основных типа гемоглобина: примитивный – Р; фетальный – F; взрослый – А.
Помимо физиологических, выделено более 200 форм патологических гемоглобинов, отличающихся друг от друга физико-химическими свойствами, в частности различной электрофоретической подвижностью и разным отношением к щелочам. Среди гемоглобинопатий наиболее известна гемоглобинопатия S – серповидно-клеточная анемия.
Одним из наиболее широко распространенных методов, позволяющих выявить патологические гемоглобины, является электрофоретический метод исследования. Исследование патологических гемоглобинов является трудоемким и проводится в специализированных лабораториях.
ЭритроцитыЭритроциты – наиболее многочисленная популяция клеток.
В кровеносном русле при нормальных физиологических условиях эритроцит имеет форму двояковогнутого диска. Сухое вещество эритроцита содержит около 95 % гемоглобина, остальные 5 % приходятся на долю других белков, липидов, ферментов. Основная функция эритроцитов – снабжение тканей кислородом и транспорт углекислого газа. Они участвуют в поддержании буферного ионно-водного равновесия, взаимодействуют с циркулирующими иммунными комплексами за счет Fс-рецепторов клеточной мембраны, обладают антигенными свойствами. Продолжительность жизни эритроцитов – 100–120 дней, разрушаются они макрофагами селезенки.
Подсчет эритроцитов в крови осуществляется двумя методами – в счетной камере и гематологическом анализаторе.
Унифицированный метод подсчета в счетной камере
Принцип
Подсчет эритроцитов под микроскопом в определенном количестве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведения крови.
Реактивы
0,9 %-ный раствор хлорида натрия.
Специальное оборудование
Счетная камера Горяева.
Микроскоп.
Ход исследования
Исследуемую кровь разводят в 200 раз. Для этого в сухую пробирку отмеривают 4 мл реактива 1. Пипеткой набирают 20 мкл крови. Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей и кровь выдувают на дно пробирки с реактивом 1, пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять до момента счета (рекомендуется считать эритроциты в течение ближайших 2–3 ч после взятия крови, а при гемолитических и В12-дефицитной анемии – сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться).
Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, затем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на него таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это свидетельствует о требуемой высоте камеры – 0,1 мм).
Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщательно встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно, без пузырьков воздуха, заполнила всю поверхность камеры с сеткой, не затекая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин (для оседания эритроцитов).
Для подсчета эритроцитов, не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа и с помощью малого увеличения микроскопа (объектив 8х, окуляр 10х) находят верхний левый край сетки (для лучшего контрастирования следует опустить конденсор и прикрыть диафрагму). Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах. Рекомендуется считать клетки в квадратах сетки, расположенных по диагонали. Для того чтобы одни и те же эритроциты, лежащие на линиях, не попали дважды в счет, принято для каждого квадрата, кроме элементов, лежащих внутри квадрата, считать расположенные на определенных двух линиях (например, на левой и верхней).
Расчет количества эритроцитов
Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого квадрата (1/4000 мкл) по следующей формуле:
X = (а х 4000 х 200) / 200,
где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови;
