Редуктометрические методы основаны на восстанавливающих свойствах глюкозы. К ним относится унифицированный метод Хайгедорна – Иенсена. Метод основан на свойстве сахаров при кипячении в щелочной среде восстанавливать красную кровяную соль в желтую кровяную соль. По степени восстановления титрометрически определяют концентрацию сахара крови. Недостаток метода заключается в том, что, в сущности, он определяет не только глюкозу, но и ряд других веществ, обладающих восстанавливающими свойствами (мочевую кислоту, глюкуроновую кислоту, витамин С и др.). Поэтому данные редуктометрических методов значительно выше концентрации глюкозы в крови.
Колориметрические методы основаны на цветных реакциях между глюкозой и концентрированной серной кислотой; глюкозой, концентрированной серной кислотой и альфа-нафтолом, или тимолом. К этой группе методов относится ортотолуидиновый метод.
Принцип: метод основан на образовании из глюкозы при нагревании в кислой среде оксиметилфурфурола, который, взаимодействуя с ортотолуидином, дает соединение зеленого цвета; интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови.
Энзиматические методы отличаются самой высокой специфичностью. Существуют различные возможности для энзиматического определения глюкозы. Наиболее широкое распространение получил глюкозооксидазный метод.
Клиническое значение
Гипергликемия – частый симптом при различных заболеваниях, прежде всего связанных с поражением эндокринной системы. Это сахарный диабет, феохромоцитома, тиреотоксикоз, акромегалия, гигантизм, синдром Кушинга. Наблюдается при заболеваниях поджелудочной железы (панкреатит, муковисцидоз, опухоль), шоке, ожогах. Гипергликемию вызывает ряд лекарств (глюкоза, кофеин, адреналин, АКГТ, кортикостероиды, тироксин, пероральные контрацептивы, диуретики, индометацин и др.).
Гипогликемия имеет место при инсулиноме, дефиците глюкагона, опухолях различных органов (рак надпочечников, желудка, фибросаркома), тяжелых поражениях печени, гипотиреозе и т. д.
С диагностической целью используют пробу с нагрузкой глюкозой – тест толерантности к глюкозе.
В течение 3–7 дней до начала теста обследуемый находится на обычной диете без ограничения и избытка жиров и углеводов.
За 3 дня отменяются инъекции глюкозы, кофеина, адреналина. В течение 3 дней пациент не должен изменять привычного режима питания и мышечной нагрузки, получая диету, содержащую не менее 150 г углеводов в сутки. В день, предшествующий проведению теста, последний прием пищи не позднее 20 ч. Перед проведением пробы необходимо 30 мин спокойно посидеть. Во время проведения пробы нельзя курить.
Кровь берут из пальца или из вены натощак и через 120 мин после перорального введения глюкозы (250–350 мл водного раствора глюкозы из расчета 1,75 г глюкозы на 1 кг массы обследуемого, для взрослого 75 кг, не более 75 г глюкозы для ребенка).
Если уровень глюкозы натощак превышает 8 ммоль/л, тест обычно прерывается.
Гликозилированный гемоглобин
Для скрининга населения на сахарный диабет определяют гликозилированный гемоглобин (HbAic). Определение HbAic может быть использовано также для диагностики ранних форм диабета (достоверно повышен у лиц с нарушенной толерантностью к глюкозе), для контроля за состоянием и лечением больных сахарным диабетом.
Гликозилированный гемоглобин – показатель гомеостаза глюкозы, интегральный показатель транзиторной гипергликемии, имевшей место у пациента в течение 3–4 месяцев, предшествующих определению.
В зависимости от метода определения содержание HbAic составляет 3–6 % от общего гемоглобина у здоровых лиц и около 20 % у пациентов с тяжелыми, запущенными, некомпенсированными формами сахарного диабета.
При определении HbAic используются методы хроматографии, электрофореза и изоэлектрического фокусирования. Эти методы характеризуются высокой точностью, но требуют специальной аппаратуры и реактивов, трудоемки в исполнении, поэтому наибольшее распространение получили менее точные, но более доступные химические колориметрические методы. Преимуществом этих методов является возможность использовать в качестве стандарта фруктозу и то, что условия взятия и хранения крови, гемоглобинопатии мало влияют на результаты анализа; эти методы не требуют специального оборудования, удобны для повседневного использования, могут быть выполнены с помощью готовых наборов реактивов.
Для работы используют цельную кровь, взятую с антикоагулянтами, эритроциты многократно отмывают от белков и глюкозы изотоническим (0,9 %) раствором хлорида натрия. Отмытые эритроциты до исследования могут храниться в холодильнике до 2 недель.
Липиды
В плазме крови человека присутствуют 4 основных класса липидов: холестерин и его эфиры, триглицериды, фосфолипиды! и неэстерифицированные жирные кислоты (НЭЖК). Первые три класса веществ образуют комплексы с апопротеинами и входят в состав липопротеинов.
Различают 3 группы липопротеинов. Наиболее крупными являются хиломикроны (ХМ) и липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП, или пребеталипопротеины). Они богаты триглицеридами, содержат апопротеины С. Менее крупными частицами являются липопротеины низкой плотности (ЛПНП или беталипопротеины), которые содержат апопротеины В. Самыми мелкими являются липопротеины высокой плотности (ЛПВП или альфалипопротеины), в состав которых входят апопротеины А.
На основании детального изучения липопротеинового спектра плазмы (сыворотки) крови у здоровых лиц и у больных, страдающих различными нарушениями липидного обмена, было показано, что повышение уровня тех или иных классов липопротеинов крови протекает по строго определенным закономерностям, независимо от того, является ли гиперлипопротеинемия наследственной (первичной) или она развивается вследствие других причин (вторичная гиперпротеинемия). Почти все случаи гиперлипопротеинемий могут быть объединены в 5 типов.
Таблица 25. Типы дислипопротеинемий
Предварительное выявление дислипопротеинемий можно провести по визуальной оценке сыворотки крови (табл. 25).
Определение содержания холестерина и триглицеридов в плазмеОпределение содержания холестерина и триглицеридов в плазме или сыворотке крови позволяет решить вопрос, о каком типе гиперлипидемий может идти речь.
Среди многочисленных методов определения холестерина в сыворотке крови наиболее распространен прямой метод, в основе которого лежит реакция Либермана – Бурхарда (метод Илька).
Клиническое значение
В норме холестерина крови 3,9–7,2 ммоль/л. Повышение показателя имеет место при семейной гиперхолестеринемии (ксантоматозе), гипотиреозе, декомпенсированном сахарном диабете, нефротическом синдроме, хроническом гепатите, билиарном циррозе, механической желтухе, гипопротеинемии, липидемии.
Показатели могут снижаться при остром гепатите и болезни Гоше; иногда при гипертиреозе, острых инфекциях, анемии, недоедании. Концентрация холестерина зависит от его метаболизма, на который влияют наследственность, питание, эндокринные железы и состояние внутренних органов.
