2) хотя потенциально перекрестно-контаминированное письмо после прохождения сортировочной машины в Трентоне было доставлено в ее дом, контаминированные таким же образом письма доставлены тысячам других адресатов в Нью-Йорке. Вашингтоне и в других частях США.
Известен только один ингаляционный случай, зарегистрированный во время этой вспышки, который предположительно можно считать связанным с перекрестной контаминацией почты — у 94-летней женщины в Оксфорде (см. ниже). Holtz Т. et al. (2003) выдвинули версию возможности еще одного маломасштабного террористических) акта, в результате которого погибла эта женщина. Возможность перекрестно-конаминированных писем вызывать заражение адресатов спорами сибирской язвы, они оценивают как сомнительную.
Загадочный случай в Оксфорде. Случай ингаляционной сибирской язвы у 94-летней женщины, уединенно жившей в своей квартире в Оксфорде (Коннектикут), зарегистрирован 14 ноября (случай 22; см. табл. 1.11). Данные молекулярно-генетического исследования свидетельствуют о том, что женщина была инфицирована тем же штаммом В. anthracis, что и другие жертвы этого теракта. Но источник ее экспонирования к рецептуре возбудителя сибирской язвы, обнаружен не был, хотя его поиски велись очень интенсивно как в ее доме, так и в других местах. Положительными на наличие спор В. anthracis оказались только центр обработки почты в Валлингфорде U.S. Postal Service Wallingford Mail Processing) и сортировочный центр в Валлингфорде, Коннектикут (Distribution Center in Wallingford, Connecticut). На почтовое оборудова-ле в Валлингфорде попадали письма с контаминированного рецептурой спор В. anthracis почтового оборудования в Гамильтоне (Hamilton, Нью-Джерси), поэтому его рассматривают основным источником перекрестной контаминации писем, доставленных в Оксфорд.
Регистрационные данные высокоскоростной почтовой сортировочной машины Гамильтоне показали, что письмо адресату в Коннектикуте прошло через нее через 5 секунд после прохождения письма с рецептурой, адресованного одному из сенаторов. Письмо было доставлено на адрес в четырех милях от того, по которому проживала женщина, погибшая от ингаляционной сибирской язвы. Этот конверт был найден и на нем обнаружены споры В. anthracis, но сибирской язвы у получателя письма они не вызвали.
Griffith К. S. et al. (2003) считают, что и этот случай трудно привести в причинно-следственную связь с известными рассылками писем сенаторам Дашли и Лихи. Но они полагают, что у проводимого ими эпидемиологического расследования есть принципиальные методические ограничения, затрудняющие достоверность получаемых результатов по контаминации спорами В. anthracis окружающей среды.
Прежде всего, неизвестен порог выявления использованными методами возбудителя сибирской язвы. Отсутствие культуры возбудителя сибирской язвы в отобранных пробах, по их мнению, не означает отсутствия его спор в окружающей среде. Дом в Оксфорде был сильно запылен и незначительные количества спор В. anthracis могли остаться не выявленными. К тому же эти авторы признают, что они не смогли отследить движение всех писем, бывших в контакте с письмами сенаторам Дашли и Лихи. Да и само исследование окружающей среды на наличие спор В. anthracis в Оксфорде начато спустя месяц после того, как споры попали в почтовую систему через Трентон.
D. В. Jernigan et al. (2002) не нашли доказательств причастности конвертов, контаминированных рецептурой сибирской язвы, для случаев 17, 21 и 22 (см. табл. 1.11). Случай 5 (почтальон в Нью-Джерси) не связан с инфицированием от почтового оборудования в Гамильтоне либо с любым другим рабочим местом, контаминированным спорами В. anthracis. Их классифицировали как относящиеся к рассылкам от 18 сентября только потому, что люди заболели сибирской язвой до рассылки от девятого октября.
Исследование окружающей среды. Результаты исследований распространения спор В. antnracis в окружающей среде после их преднамеренного диссеминирования, можно обобщить следующим образом.
Концентрация спор возрастала по мере приближения к их источнику.
Споры оставались на поверхностях механизмов машины № 17 и вокруг нее спустя два месяца после того, как через нее прошли письма, хотя ее очищали вакуумом и мыли раствором натрия гипохлорита (sodium hypochlorite solution). Сибирской язвы у лиц, соприкасавшихся с поверхностями, контаминированными спорами В. anthracis, не возникало.
Мытье и очистка вакуумом поверхностей, контаминированных спорами В. anthracis, хоть и не освобождали их полностью от спор, но значительно снижали их концентрацию.
Ложные отрицательные результаты исследования образцов на В. anthracis могут быть получены вследствие неадекватных методов сбора спор с поверхностей, их подращивания в питательной среде и последующего анализа.
Вакуумный сбор спор В. anthracis с поверхностей дает более достоверные результаты, чем получение их другими способами (ватные тампоны и т. п.). Для бактериологического исследования должна быть взята вся проба.
Пробы воздуха в сортировочном центре в Вашингтоне не содержали спор В. anthracis, но их смывали с поверхностей помещений через 12 сут., после того как контаминированные письма прошли через сортировочную машину, и спустя трое суток, после того как вентиляция в сортировочном центре была выключена. Эти данные показывают, что, по крайней мере, в течение нескольких дней споры исчезают из воздуха контаминированных помещений.
Нет достоверных данных в пользу того, что инфицирование людей возбудителем сибирской язвы может произойти в результате реаэрозолирования спор, осевших на поверхности предметов, окружавших человека в момент формирования первичного аэрозоля.
Идентификация. При расследовании биотеррористической вспышки в США в 2001 г. были заложены основы нового направления в криминалистике — судебной микробиологии. Случаи сибирской язвы среди людей в сентябре — октябре 2001 г. выявлены в семи штатах, расположенных вдоль Восточного побережья США. Сибирская язва встречалась в разных клинических формах. Механизм инфицирования людей, по крайней мере, для двух из них, так и остался неясным. Широко используемые в 1990-х гг. для дифференциации штаммов микроорганизмов такие методы, как многолокусный энзимэлектрофорез (МЕЕ), многолокусное типирование последовательностей (MLST) и анализ длины амплифицированных фрагментов (AFLP), оказались недостаточно чувствительными для выявления генетических различий между штаммами В. anthracis.
Поэтому для субтипирования В. anthracis был использован разработанный P. Keim (2000) анализ многолокусных вариабельных тандемных повторов (multiple-locus variable-number tandem repeat analysis, MLVA). В отличие от AFLP, его можно использовать только для субтипирования штаммов сибиреязвенного микроба, для изучения филогенетических связей между видами, представителями рода Bacillus, он не пригоден (см. разд. 3.1)
MLVA позволяет определять количество копий вариабельно-количественных тандемных повторов (variable-number tanderr repeats, VNTR) восьми генетических локусов В. anthracis (шесть на хромосоме и по одному на каждой из плазмид). Способ относительно простой и позволяет типировать множество штаммов в одном геле за 8 ч. Благодаря его использованию, ученым из CDS удалось установить, что все 22 случая сибирской язвы, выявленные в сентябре — октябре 2001 г., вызваны штаммом Ames. Благодаря его обнаружению:
