Гемадсорбцией называется способность клеток, зараженных некоторыми вирусами, фиксировать на своей поверхности эритроциты. В частности, гемадсорбцию могут вызывать вирусы гриппа и парагриппа. Преимущество реакции гемадсорбции заключается в ее раннем появлении у зараженных клеточных культур – эритроциты начинают прилипать к клеткам задолго до того, как в клетках появятся изменения, вызванные размножающимся вирусом. Кроме того, некоторые вирусы (например – вирусы парагриппа) не проявляют выраженного цитопатического действия и главным признаком их присутствия является гемадсорбция.
Приставка «гем-» всегда указывает на то, что речь идет о чем-то связанном с кровью, которая по-гречески называется «гема». Гем-адсорбция – это адсорбция (присоединение к клеточной мембране) чего-то содержащегося в крови. А
[43]гемагглютинацией («склеиванием крови») называется процесс склеивания и последующего осаждения эритроцитов, который вызывается некоторыми вирусами, а также некоторыми бактериями и некоторыми белками. Вирус прикрепляется к поверхности мембраны одного эритроцита, а затем к нему прикрепляется другой эритроцит. Получается, что вирус выступает в роли клея.
Реакцию гемагглютинации используют не только для определения природы исследуемого вируса, но и для определения количества активных вирусов в материале. Дело в том, что вирусы, нейтрализованные антителами, лишаются способности склеивать эритроциты.
Если разобраться, то все становится простым и понятным, верно?
Следующий метод диагностики – вирусоскопический. При этом методе в микроскоп рассматриваются не жертвы вирусов, а сами вирусы. Разумеется, материал исследуется с помощью электронного, а не светового, микроскопа. Вирусоскопический метод, он же – метод электронной микроскопии, дает возможность обнаружить вирионы, но он недостаточно надежен и недостаточно специфичен (зачастую бывает сложно определить вид вируса по его внешнему виду).
Более специфичным, более надежным и более чувствительным (то есть – лучше выявляющим присутствие вируса) является метод иммунной электронной микроскопии. Слово «иммунной» указывает на использование антител.
Содержащий вирус материал смешивают со специфической сывороткой, в которой присутствуют антитела к определенному вирусу. При взаимодействии антител с вирусами образуется осадок из микроскопических частиц. Антитела могут связываться только с определенными антигенами, белками определенных вирусов. Сыворотка против вируса А, не образует осадка ни с чем, кроме вируса А. Зная тип сыворотки и наблюдая выпадение осадка, можно точно сказать, что в материале находится именно вирус А.
Метод иммунной электронной микроскопии особенно важен и ценен при поиске вирусов, которые не размножаются в клеточных культурах и для которых не создано каких-то тестовых систем. Но, как вы понимаете, для массовых исследований этот метод непригоден, поскольку требует сложной аппаратуры и сам по себе является довольно сложным.
Массовыми в наше время являются серологические методы, основанные на определении антител в биологических жидкостях (чаще всего – в крови) с целью установления факта контакта организма с определенным возбудителем инфекционного заболевания. А по концентрации антител можно судить о стадии заболевания или характере инфекционного процесса (острый он или хронический и т. п.).
«Серум» в переводе с латыни означает «сыворотка». Серология – это наука о свойствах сыворотки крови, жидкой части крови, лишенной форменных элементов (клеток крови) и белка фибриногена, обеспечивающего свертывание крови.
[44]
Иногда серологическими методами определяют не антитела, вырабатываемые к антигенам, а сами антигены, но такое бывает редко. Подавляющее большинство серологических исследований основано на определении антител, посредством которых организм сигнализирует о наличии в нем инфекционных агентов.
Для выявления вирусов могут быть использованы различные серологические реакции, с которыми мы сейчас ознакомимся.
Очень быстрой и удобной в смысле оценки результата, а также недорогой по стоимости, является реакция гемагглютинации, при которой комплекс антигена с антителом адсорбируется на эритроцитах и вызывает их слипание. К стандартным сывороткам, содержащим антитела, добавляют исследуемый материал (кровь) и смотрят – образовался ли осадок.
Реакция пассивной гемагглютинации, при которой на эритроциты заранее «подсаживаются» антигены способные взаимодействовать с соответствующими антителами сыворотки крови является более чувствительной, чем реакция гемагглютинации. По чувствительности она приближается к иммуноферментному методу, о котором будет сказано ниже. Другие достоинства реакции – это простота ее постановки и быстрое получение ответа (через 2 часа). Однако есть у этого метода и недостатки, ограничивающие его использование. К недостаткам относятся сложность приготовления стабильных эритроцитов с подсаженными на них антигенами. Этот процесс требует соблюдения множества условий и сильно зависит от чистоты используемых компонентов.
Диагностику можно проводить и «наизнанку», используя реакцию торможения гемагглютинации, которая основана на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в случае наличия в сыворотке крови антител к этому вирусу. Ставится реакция просто – в исследуемую кровь добавляют конкретный вирус, наличие которого подозревают в организме пациента, и смотрят – удается ли ему это сделать (если удается, значит, в организме человека, у которого была взята кровь, этого вируса нет).
Использование любых реакций гемагглютинации возможно лишь для определения вирусов, способных склеивать эритроциты. Если вирус такой способностью не обладает, приходится «выводить его на чистую воду» другими методами.
Суть реакции связывания комплемента состоит в том, что в результате взаимодействия антигенов и антител образуется иммунный комплекс, к которому присоединяется комплемент, в качестве которого обычно используют свежую или сухую сыворотку морской свинки, наиболее распространенного лабораторного животного. По сути дела, к комплексам из антигенов и антител прицепляют метку – белковые молекулы комплемента, чтобы сделать их более заметными. Результат реакции оценивается невооруженным глазом. Реакция высокочувствительная, она позволяет обнаруживать образование комплекса «антиген-антитело» в тех случаях, когда другие серологические реакции, такие как преципитация (см. ниже) или агглютинация, не позволяют этого сделать. Кроме того, в реакции связывания комплемента могут использоваться как растворимые, так и нерастворимые антигены.
[45]
